کلون کردن ژن آنتی ژن ایمنی بخشbacillus anthracis در bacillus subtilis

سابقه و هدف: آنتی ژن ایمنی بخش(pa) (protective antigen) bacillus anthracis به عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می گیرد. کلون و بیان ژن pa در سویه های مختلف گزارش شده است که بیش ترین بیان، در b. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن pa در ناقل بیان کننده pwb980 و انتقال آن به b. subtilis سویه wb600 می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه پلاسمید pxo1 از b. anthracis سویه stern با روش قلیا جدا و ترادف بازی kb 4/2 ژن با استفاده از pcr تکثیر گردید. قطعه تکثیر یافته به طور مستقیم بر روی ناقل ptz57r کلون و با استفاده از روش cacl2 به e.coli سویه dh5α انتقال یافت. سپس ژن با آنزیم های sali و kpniاز روی t-vector جدا گردید. واکنش اتصال بین قطعه ژن خالص شده pa و ناقل pwb980 گذاشته شد و سپس با روش electroporation در v 1000 به b. subtilis منتقل شد. یافته ها: در این تحقیق توانستیم ژن pa را به وسیله pcr از b. anthracis سویه stern جدا و ابتدا در پلاسمید ptz57r کلون کرده و وجود ژن با تجزیه و تحلیل آنزیمی، واکنش pcr و تعیین ترادف بازی (sequencing) تأیید گردید. سپس ژن بر روی ناقل بیان کننده pwb980 و در b. subtilis کلون و وجود ژن در دو کلنی مقاوم به کانامایسین amn1 و amn3 با استفاده از تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش pcr تأیید گردید. نتیجه گیری: در این تحقیق با تغییر در روش های مورد استفاده و استفاده از ناقل بیان کننده pwb980 توانستیم ژن pa را درb. subtilis کلون کنیم. این ژن برای اولین بار در ایران جدا و کلون شده است؛ هم چنین این تحقیق اولین کار کلون کردن ژن در میزبان b. subtilis در ایران می باشد.